Back to Main

  Back to previous

 
  Protocols

 
  Medline

 
  Recent Developments

 
  Conferences













 

 
  Βιοψία εμβρύου

Στην αρχική μελέτη που είχαν κάνει οι Gardner & Edwards το 1968 στο κουνέλι, η βιοψία είχε γίνει στο στάδιο της βλαστοκύστης με αφαίρεση κυττάρων τροφοβλάστης. Αυτή η μέθοδος έχει ιδιαίτερα πλεονεκτήματα. Το πιο σημαντικό είναι ότι σε αυτό το στάδιο το έμβρυο έχει το μεγαλύτερο αριθμό κυττάρων πριν από την εμφύτευση και είναι ευνόητο οτι όσο μεγαλύτερος είναι ο αριθμός των κυττάρων που αναλύονται, τόσο πιο αξιόπιστη είναι η διάγνωση. Η ανθρώπινη βλαστοκύστη in vitro έχει 58-126 κύτταρα μεταξύ της πέμπτης και έβδομης ημέρας και η πλειονότητα των κυττάρων αυτών είναι κύτταρα τροφοβλάστης (Hardy et. al, 1989). Η ανάπτυξη μπορεί να συνεχιστεί κανονικά in vitro αν αφαιρεθούν περίπου 10-30 κύτταρα (Dockras et al, 1989). Η διαδικασία της βιοψίας βλαστοκύστεων περιλαμβάνει το άνοιγμα της διαφανούς ζώνης που περιβάλλει το έμβρυο. Την επόμενη ημέρα, τα κύτταρα της τροφοβλάστης αναπτύσσονται έξω από τη ζώνη και αφαιρούνται εύκολα. Ένα άλλο σημαντικό πλεονέκτημα είναι ότι τα κύτταρα της τροφοβλάστης θα δώσουν γένεση μόνο σε ιστούς πλακούντα μετά την εμφύτευση. Συνεπώς, η αφαίρεση μερικών τροφοβλαστικών κυττάρων δεν θα πρέπει να επηρεάσει τη φυσιολογική ανάπτυξη του εμβρύου το οποίο προέρχεται αποκλειστικά από την εμβρυοβλάστη. Τελικά κάνοντας βιοψία στο στάδιο της βλαστοκύστης, η εμβρυϊκή γονιδιακή έκφραση έχει ήδη ξεκινήσει, επιτρέποντας τη διάγνωση μεταβολικών ασθενειών με πολύ ευαίσθητα βιοχημικά tests. Το μεγαλύτερο πρόβλημα με τη βιοψία βλαστοκύστης είναι το πολύ χαμηλό ποσοστό εγκυμοσύνης μετά από εμβρυομεταφορά σε αυτό το στάδιο. Επιπλέον, μόνο ένα μικρό ποσοστό, (είναι περίπου το μισό των εμβρύων αυτών που θα παραχθούν με εξωσωματική γονιμοποίηση), φτάνει το στάδιο της βλαστοκύστης σε συνθήκες καλλιέργειας in vitro. Έτσι ο αριθμός των εμβρύων που θα διαγνωστούν ως υγιή και θα μεταφερθούν αργότερα στη μητέρα μειώνεται και παράλληλα μειώνεται και η πιθανότητα εγκυμοσύνης. Ένα άλλο μειονέκτημα είναι οτι η αφαίρεση ενός σημαντικού κομματιού τροφοβλάστης (επειδή η τροφοβλάστη δίνει γένεση σε ιστούς του πλακούντα), πιθανόν να επηρεάσει την εμφύτευση ή τη συνέχιση της εγκυμοσύνης. Έτσι, παρ'όλο που στο στάδιο του μοριδίου το έμβρυο έχει λιγότερα κύτταρα, η βιοψία σε αυτό το στάδιο είναι η μόνη πρακτική εναλλακτική λύση. Στο στάδιο της αυλάκωσης (Cleavage Stage) το καθένα από τα βλαστομερίδια παραμένει παντοδύναμο (Totipotent) και μπορεί να δώσει γένεση σε όλους τους ιστούς του εμβρύου.

Η βιοψία νωρίς το πρωί της τρίτης ημέρας δίνει ένα περιθώριο 12 περίπου ωρών για τη γενετική ανάλυση. Σ' αυτό το διάστημα τα έμβρυα μπορούν να παραμείνουν στην καλλιέργεια, και η εμβρυομεταφορά μπορεί να πραγματοποιηθεί στο τέλος της ίδιας ημέρας. Αυτός ο περιορισμός των ωρών θα μπορούσε να υπερπηδηθεί με την κατάψυξη των εμβρύων και τη μεταφορά τους σε επόμενους κύκλους. Το άνοιγμα όμως στη διαφανή ζώνη μπορεί να αυξήσει το ποσοστό των εμβρύων τα οποία θα καταστραφούν κατά τη διάρκεια της κατάψυξης μια και η παρουσία μιας άθικτης διαφανούς ζώνης είναι πιθανόν να προστατεύει από τη μηχανική ζημιά που θα προκληθεί από κρυστάλλους που σχηματίζονται στο υγρό καλλιέργειας (Thomson et al, 1995).

Έμβρυα τα οποία έχουν γονιμοποιηθεί φυσιολογικά, όταν φτάσουν στο κατάλληλο στάδιο (6-10 κύτταρα) τοποθετούνται σε σταγόνες υγρού καλλιέργειας κάτω από λάδι και μεταφέρονται στο μικροσκόπιο για βιοψία με τη βοήθεια μικροχειριστηρίων (micromanipulators). Το έμβρυο ακινητοποιείται με αναρρόφηση πάνω σε μία πιπέτα συγκράτησης. Μία μικροπιπέτα ανοίγει μια οπή στη διαφανή του ζώνη με ένα όξινο διάλυμα (Acid Tyrodes). Mία δεύτερη μικροπιπέτα (με μεγαλύτερη διάμετρο) μπαίνει μέσα από τη ζώνη και με αναρρόφηση αφαιρεί ένα ή δύο βλαστομερίδια από το έμβρυο. Το έμβρυο επιστρέφει σε συνθήκες καλλιέργειας και τα κύτταρα τα οποία αφαιρέθηκαν ετοιμάζονται για ανάλυση. Όλη η διαδικασία της βιοψίας μπορεί να τελειώσει μέσα σε 10-15' (Handyside & Kontogianni, 1990).

[ contents | previous | next ]